液相色譜儀操作要注意什么,看完你就知道了[最新更新]
液相色譜儀操作要注意什么,液相色譜儀利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對復雜樣品進行高效分離與分析。其操作不僅要求技術精湛,還需嚴格遵循操作規范,以確保實驗結果的可靠性和儀器的穩定運行,今天天恒就帶大家來了解液相色譜儀操作要注意什么。
一、流動相處理
流動相選擇:流動相必須使用HPLC級試劑,以確保其純度和穩定性。使用前需過濾以去除顆粒性雜質和其他物質,常用0.45μm或更細的濾膜進行過濾。
脫氣處理:過濾后的流動相需進行超聲波脫氣,以去除溶解在其中的氣體,避免氣泡對實驗結果的影響。脫氣后應恢復至室溫再使用。
避免純乙腈作為流動相:純乙腈作為流動相易導致單向閥粘住,影響泵的正常工作,因此應避免使用。
二、色譜柱維護
使用前準備:使用色譜柱前,應仔細閱讀其附帶的說明書,了解適用范圍、pH值范圍等關鍵信息。對于含鹽流動相,使用后應先用水或低濃度甲醇水沖洗,再用甲醇徹底沖洗,以延長色譜柱的使用壽命。
輕拿輕放:色譜柱為精密儀器,使用過程中應輕拿輕放,避免劇烈震動或碰撞。
保存條件:長時間不使用色譜柱時,應將其取下并用堵頭封好保存。避免使用純水保存,因為純水易導致長霉,應選用有機相(如甲醇)進行保存。
三、儀器開機與關機
開機操作:開機前,應檢查各組件電源連接是否正確,確保Harb電源穩定。自上而下打開各組件電源,待BootpServer顯示有信號后,再打開工作站進行后續操作。
沖洗系統:開機后,需用流動相沖洗系統一段時間,以確保系統穩定。對于含鹽流動相,應先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相。
關機操作:實驗結束后,應先關閉泵、檢測器等組件,再關閉工作站和計算機。自下而上關閉色譜儀各組件電源,確保儀器安全關閉。
四、樣品處理與進樣
樣品處理:樣品應提前處理至適合液相色譜分析的狀態,避免雜質對色譜柱和儀器的損害。對于易揮發性樣品,應采取相應措施減少揮發。
進樣操作:使用手動進樣器進樣時,進樣前后均需用洗針液洗凈進樣針筒。洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑,進樣前必須用樣品液清洗進樣針筒三遍以上,并排除針筒中的氣泡。
避免污染:C18柱等特定色譜柱不能進蛋白樣品、血樣、生物樣品等易污染物質,以免損壞色譜柱和影響實驗結果。
五、清洗與保養
清洗管路:使用緩沖溶液后,應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時,再用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對于柱塞桿外部,也需用去離子水沖洗。
定期檢查:定期檢查儀器各部件的連接情況,確保無漏液現象。若發現壓力異常,應及時檢查并排除故障。
記錄與報告:使用者應認真履行儀器使用登記制度,記錄每次實驗的操作過程和結果。出現問題時,應及時向老師或專業人員報告,不得擅自拆卸儀器。
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